Production par voie biotechnologique de métabolites secondaires d'intérêt à partir de Calotropis procera application en protection des végétaux

Abstract

Caloiropis procera (Apocynaceae) est une plante médicinale riche en molécules bioactives ayant une importance économique de par leur utilisation en pharmacologie qu'en agriculture. De par leur intérêt, la production par voie bioteclmologique (via les chevelus racinaires (CRs)) de ces métabolites constitue une voie prometteuse. La première partie de la thèse consiste à développer un protocole d'induction de CRs efficace pour C. procera. La deuxième partie aborde l'analyse de la composition phytochimique des CRs de C. procera par GC-MS et UHPLC-QTOF/MS. Dans la perspective de valorisation dans la protection des cultures, l'évaluation du potentiel nématicide des extraits de CRs de C procera a été réalisée. Concernant l'induction des CRs, nos résultats montrent que la souche bactérienne, le type et l'âge des expiants ainsi que le milieu de co-culture utilisé jouent un rôle prépondérant. Ainsi, la fréquence de transformation optimale (95%) est obtenue avec des feuilles âgées de 30 jours et inoculées par la souche A4 sur le milieu'/ B5. La nature transgénique de nos CRs a été confirmée par amplification PCR du gène roi B. Les différences du taux de croiggince et de teneurs en phytostérols (carupesterol, en stigmastérol et en p-sitostérol) entre les sept lignées racinaires sélectionnées est extrêmement significatives. La lignée HR4 a donné le rendement le plus élevé, atteignant 345,8 pg de campestérollg M.S., 411,8 pg de stigmastérollg MS. et 438.3 tg de D-sitostérol par g de M.S. Par ailleurs, l'analyse des extraits des CRs par GC-MS a permis de mettre en évidence trente-six composés bioactifs de différentes classes métaboliques dont les plus importants sont les stérols. En outre, la caractérisation des glycosides cardiaques de l'extrait éthanolique des CRs de C. procera par UHPLC-QT0F/MS met en évidence la présence de dix molécules bioactives. Flifin, l'évaluation de la toxicité de l'extrait aqueux des CRs de C procera sur les nématodes (Meloigogyne spp.) montre une mortalité totale (100 %), et ce, pour les extraits des sept lignées racinaires.