Etude comparative de l’effet des méthodes d’extraction sur la qualité de l’ADN génomique de Sitophilus oryzae

Abstract

Sitophilus oryzae (L.) (Coleoptera : Curculionidae) est un ravageur des denrées alimentaires stockées, connue pour sa forte résistance aux insecticides le rendant difficile à contrôler par les méthodes conventionnelles, ce qui nécessite un recours vers d’autres alternatives. Les études moléculaires comptent parmi les outils les plus importants pour l’identification des insectes ainsi que pour un contrôle efficace. L’extraction d’ADN en est la première étape. Notre étude a fait l’objet d’optimisation d’une méthode d’extraction adaptée au charançon du riz de l’Algérie. Pour se faire, des comparaisons entre deux méthodes d’extraction d’ADN (CTAB et SDS) ont été réalisées en modifiant les paramètres de l’extraction tels que ; la concentration du tampon de lyse (SDS1 contenant 0.5% et SDS2 contenant 1% de SDS ; CTAB1 avec 2% et CTAB2 avec 4% de CTAB), la concentration du solvant d’extraction (C1 contenait 48 :2 et C2 contenait 40 :10 de chloroforme : Isoamyle) et le type de solution de précipitation et de lavage d’ADN (substitution entre l’éthanol et l’isopropanol), toutes les combinaisons possible ont été testées. Pour évaluer l’effet de chaque traitement sur la qualité et la quantité d’ADN génomique, une quantification d’ADN par spectrophotométrie et une électrophorèse sur gel d’agarose à 0.8% ont été exécutées. Les résultats ont montré que la méthode au CTAB est plus efficace par rapport à celle de SDS, en termes de qualité et de quantité d’ADN obtenu. Les meilleurs traitements sélectionnés sont : CTAB2.C1.ISO suivi de CTAB1.C1.ET et CTAB2.C1.ET.