Isolement purification et culture de protoplastes de pomme de terre (Solanum tuberosum L.) variété Désirée

Abstract

Notre travail a porté sur l’isolement, la purification et la culture de protoplastes de pomme de terre (Solanum tuberosum L.), variété Désirée. Pour ce faire deux types d’explants ont été utilisés, des feuilles de vitroplants âgés de 6 à 7 semaines issus de culture de bourgeons prélevés sur des germes de tubercules prégermés et des cals friables (d’entre nœuds et de feuilles) âgés de 4 à 5 semaines issus du repiquage des cals durs. Les concentrations d’enzymes 1% de cellulase trychoderma et 0.3% de macérozyme R-10 ; pH de 5 et 0.5 mole de mannitol ont permis l’obtention des meilleurs rendements (plus de 106 protoplastes/g- MF) après 3h00 et 6h00 de macération respectivement pour les protoplastes de feuilles et ceux issus de cals friables. La macération a été réalisée dans la solution MS sans sucre. L’addition du CaCl2 à une concentration de 0.05 mole s’est avérée bénéfique pour la stabilité de la membrane plasmique des protoplastes issus de feuilles de vitroplants, les protoplastes de cals se sont montrés plus stables sans CaCl2. Au cours des essais de purification sur monocouche de saccharose les concentrations et vitesses de centrifugations 30% pendant 15 mns et 21% pendant 20 mns ont permis une bonne purification respectivement pour les protoplastes de feuilles de vitroplants et ceux issus de cals friables (d’entre nœuds et de feuilles). Le milieu de culture MS (macoéléments/2 sans NH4NO3; microéléments/2 + 3mg/l d’ANA + 1mg/l de BAP + 0.18 mole de glucose + 0.18 mole de mannitol + 0.07 de saccharose) a permis d’obtenir le meilleur taux de division qui a été de 21.22%. Le stade de microcolonies (plus de 10 cellules) a été atteint