Isolement, Purification et culture de protoplastes de Datura stramonium L.

Abstract

L’objectif de ce travail est l’étude des facteurs influençant l’isolement, la purification et la culture de protoplastes à partir de différents tissus de D. stramonium. Les meilleurs résultats d’isolement sont ceux obtenus avec les feuilles de vitrosemis âgées de 04 mois découpées et mises dans une solution de macération contenant le milieu MS additionné de 1,5% de cellulase Trichoderma longibrachiatum, 0,02% de macerozyme R-10, 0,5 M de mannitol et ajusté au pH 5 (9,8 x 106 proto./ g MF dont 92% sont viables). La purification des protoplastes est réalisée sur monocouche 20% de saccharose avec centrifugation à 80% pendant 8 minutes. La culture des protoplastes purifiés est réalisée à une densité de 104 proto./ml dans le milieu MS contenant 0,18 M de mannitol + 0,18 M de glucose + 0,14 M de saccharose + 0,2 mg/l ANA + 0.5 mg/l BAP + 0.2 mg/l de 2,4-D ajusté au pH 5 et solidifié avec 3,5 g/l d’agarose. Ces conditions de culture permettent d’avoir les meilleurs taux de viabilité (80%) et d’entrée en divisions (3%) des protoplastes de Datura stramoniumI au 12ème jour de culture.